Процедура определения групп крови по системе АВО заключается в выявлении антигенов А и В в эритроцитах с помощью стандартных антител и использованием агглютининов в плазме или сыворотке анализируемой крови стандартными эритроцитами. Методика разработана в начале XX века и до сих пор активно применяется в медицине. Определение антигенов А и В осуществляется благодаря цоликлонам анти-А и анти-В.
Основные понятия
У доноров всегда определяются не только антигены в эритроцитах, но и агглютинины в сыворотке (плазме) с применением стандартных эритроцитов. В качестве биоматериала используется венозная кровь. Перед исследованием необходимо отказаться от жирной пищи за сутки до анализа и не курить за полчаса до сдачи теста. Группы крови определяют дважды: сначала в лечебном отделении, где заготавливается материал, а затем подтверждают исследованием в лаборатории.
Определение групп крови по системе АВО является основным тестом, который используется в трансфузиологии. Также подобная система групп крови есть у некоторых животных, например у шимпанзе, горилл и бонобо.
История открытия
В науке существует общепринятое мнение о том, что методика определения групп крови по системе АВО была выявлена впервые Карлом Ландштейнером, австрийским учёным, в 1900 году. Тогда он описал в своём труде три типа антигенов. За это через тридцать лет ему была присуждена Нобелевская премия по медицине и физиологии. Из-за того, что между учёными раньше не было тесных связей, позже установили, что чешский врач-серолог Ян Янский независимо от изысканий К. Ландштейнера впервые описал четыре группы крови человека, но его исследования были не известны широкой аудитории. В настоящее время именно классификация, разработанная Я. Янским, применяется в России и республиках бывшего СССР. В США У. Л. Мосс создал свою похожую работу в 1910 г.
Методика определения групп крови по системе АВО с помощью цоликлонов
Группа крови должна определяться в помещении с хорошим освещением с соблюдением диапазона температуры от 15 до 25 градусов Цельсия, так как отклонения от этой нормы могут повлиять на результаты исследования. На пластинке или тарелке пишутся инициалы и фамилия пациента. Слева направо или по кругу наносят стандартные обозначения групп (О(I), A(II), В(III)). Под ними размещают по капле соответствующие сыворотки отдельными пипетками для каждого вида. Затем к ним добавляется кровь пациента. Материал для исследования берется из мочки уха или пальца. Этого требует техника определения группы крови по системе АВО.
Правомерно также использование эритроцитов, находящихся в пробирке после того, как образовался сгусток. Нужно, чтобы количество сыворотки было больше количества добавленной крови в десять раз. После этого капли перемешиваются стеклянными палочками (отдельно для каждой). В течение пяти минут, аккуратно покачивая пластинку, смотрят за появлением реакции гемагглютинации. Она обнаруживается в том, что появляются маленькие красные комочки, сливающиеся затем в более крупные. Сыворотка в это время практически полностью теряет цвет.
Для того чтобы устранить ложную гемагглютинацию простого склеивания эритроцитов, нужно через три минуты добавить одну каплю физиологического раствора и проверить, сохраняется ли агглютинация. Если да, то она является истинной. Все, определение групп крови по системе АВО на этом завершено.
Толкование результатов
В результате могут наблюдаться четыре реакции:
- не происходит агглютинация ни с одной из сывороток - первая группа О(I);
- реакция проявилась с сыворотками I(ab) и III(a) - вторая группа А(II);
- агглютинация наступает с сыворотками I(ab) и II(b) - третья группа В(III);
- если реакция происходит с тремя сыворотками, нужно провести дополнительную процедуру с реактивами группы АВ(IV), которые являются стандартными; если агглютинация в такой капле отсутствует, можно считать, что это 4-я группа крови АВ(IV).
Экспресс-метод для резус-фактора
Методика определения групп крови по системе АВО предполагает одновременное выявление резус-фактора (Rh).
Поверхность пластинки предварительно смачивают и пишут на ней «контрольная сыворотка» и «сыворотка антирезус». Затем под надписями располагают одну-две капли нужных реактивов и добавляют к ним анализируемый материал. Для этого также можно использовать кровь из пальца (в таком же количестве, как и объём сыворотки) или эритроциты, оставшиеся на дне пробирки после появления сгустка (половина объёма сыворотки). Выбор материала на конечный результат не влияет. Затем кровь и сыворотка перемешиваются сухой стеклянной палочкой, после чего в течение пяти минут ожидают наступления реакции. Для того чтобы устранить ложные показания, через три-четыре минуты добавляют изотонический раствор натрия хлорида (всего несколько капель). Определение группы крови по системе АВО и Rh проводится очень часто.
Если агглютинация эритроцитов в капле с сывороткой происходит, это указывает на положительный резус крови. По статистике Rh+ встречается у 85 % населения планеты. Отсутствие её позволяет говорить о резус-отрицательной принадлежности. Если агглютинация появилась в контрольной сыворотке, значит она пришла в негодность. К сожалению, алгоритм определения группы крови по системе АВО не всегда срабатывает идеально.
Какие ошибки могут быть допущены при данной методике?
Неточности при определении принадлежности крови той или иной группе зависят от следующих причин:
- Технических.
- Биологической специфики исследуемой крови.
- Неполноценного характера стандартных сывороток и эритроцитов.
Технические ошибки
Возможные погрешности при определении группы крови системы АВО перекрестным способом:
Ошибки биологической специфики
Погрешности, связанные с биологической спецификой анализируемой крови, делятся на два типа.
- Зависящие от особенностей эритроцитов.
- Ошибки, обусловленные биологическими особенностями сыворотки.
Рассмотрим каждый вид более подробно.
Зависящие от особенностей эритроцитов
- Поздняя агглютинация, объясняющаяся «слабыми» формами эритроцитов и антигенов. Для того чтобы избежать ошибок, определять группу крови доноров и реципиентов нужно с использованием стандартных эритроцитов. Индентифицировать агглютиноген А 2 следует повторным исследованием с другими видами реагентов и другой посуды, увеличив время регистрации реакции.
- «Панагглютинация» («аутоагглютинация») - умение крови проявлять одинаковую реакцию неспецифического характера со всеми сыворотками, в том числе с собственной. Через пять минут острота такой агглютинации слабеет, хотя должна усиливаться. Подобные случаи наблюдаются у онкобольных, обожжённых и др. В качестве контроля необходимо оценить проявление агглютинации анализируемых эритроцитов в стандартной сыворотке четвёртой группы и физрастворе. При «панагглютинации» группу крови определяют в результате тройного отмывания эритроцитов. Если оно не даёт нужного результата, стоит произвести повторный забор образца крови в согретую перед процедурой пробирку и поставить пробу в термоконтейнер, чтобы способствовать поддержанию температуры 37 градусов Цельсия и выше. Затем следует доставить в лабораторию, где сохраняется указанная выше температура и используются подогретые физиологический раствор, пластинка и реактивы.
- Иногда эритроциты анализируемой крови располагаются как «монетные столбики», и их можно принять за агглютинаты. Если добавить две капли изотонического раствора и мягко покачать планшет, красные кровяные клетки занимают правильную позицию.
- Неполная или смешанная агглютинация, встречающаяся у пациентов со второй, третьей и четвёртой группами в результате трансплантации костного мозга или в первые три месяца после переливания крови 0(I).
Обусловленные биологическими особенностями сыворотки
Ошибки, связанные с применением неполноценных стандартных эритроцитов и сывороток
Слабые сыворотки с прошедшим сроком годности или имеющие титр меньше 1:32 способны зарождать слабую и позднюю агглютинацию. Применение таких реактивов недопустимо.
Использование негодных стандартных эритроцитов или сывороток, приготовленных в нестерильных условиях и законсервированных в недостаточной степени, приводит к появлению «бактериальной» агглютинации, имеющей неспецифическую природу.
Существует множество популярных предположений о группах крови системы АВО, появившихся непосредственно после её обнаружения в разных мировых культурах. Так, например, в 30-е годы прошлого столетия в Японии и некоторых других странах получила популярность теория, связывающая группу крови с тем или иным типом личности. Подобные теории популярны и на сегодняшний день.
Есть также мнение, что человек, имеющий группу А, подвержен тяжёлому похмелью, О связана с хорошими зубами, а группа А2 - с самым высоким уровнем IQ. Но научно такие утверждения не доказаны.
Мы рассмотрели определение групп крови по системе АВО с помощью стандартных сывороток.
Показания: необходимость переливания крови, подготовка к оперативному вмешательств.
Приготовить: стандартную тарелочку с углублениями;набор стеклянных палочек;изотонический раствор хлорида натрия;набор гемагглютинирующих сывороток 1,2,3,4 групп двух серий;пипетки;исследуемую взятую из вены или пальца кровь; часы; лотки;перчатки; емкости для отработанного материала; контейнеры с дезинфицирующими растворами.
Подготовка к манипуляции:
- Медицинская сестра полностью подготовлена к выполнению манипуляции: одета в костюм (халат), маску, перчатки, колпак, сменную обувь.
- Проверить качество стандартных гемагглютинирующих сывороток по: цветовой маркировке, внешнему виду (светлая, прозрачная); сохранность упаковки, наличию правильно оформленной этикетки.
- Подготовить все необходимое для выполнения манипуляции.
Выполнение манипуляции:
на белую тарелочку, согласно обозначению, последовательно нанести по одной капле сыворотки 1, 2, 3 групп двух серий. Каждую пипетку немедленно опускать в ту же ампулу (флакон) из которых они были взяты;
с помощью стеклянной палочки нанести рядом с углублениями (6 углублений) по капле исследуемой крови. Капля крови должна быть в 10 раз меньше капли сыворотки;
отметить время и чистой, сухой стеклянной палочкой перемешать кровь с сывороткой 1 гр., затем другой палочкой 2 гр. и т.д. во всех углублениях;
по мере наступления агглютинации, но не ранее 3 минуты, в те капли, в которых наступила реакция агглютинации добавить по одной капле изотонического раствора хлорида натрия для исключения ложной агглютинации и продолжать наблюдение в течение 5 минут.
Оценка результатов:
а) при положительной реакции в смеси появляются видимые глазом мельчайшие зернышки, состоящие из склеившихся эритроцитов. Мелкие зерна сливаются в крупные зерна, а иногда в хлопья, сыворотка при этом – обесцвечивается;
б) при отрицательной реакции жидкость остается равномерно окрашенной в розовый цвет;
в) возможны 4 комбинации положительной и отрицательной реакции:
1. если агглютинации нет ни в одной из ячеек, то кровь I (0) группы.
2. если агглютинация в первой и третей ячейках, то кровь II (А) группы.
3. если агглютинация в первой и второй группах, то кровь III (В) группы.
4. если агглютинация в первой, второй, третей ячейках, то кровь IV (АВ) группы.
Для исключения ошибки проверяют кровь с сывороткой 4 группы, где агглютинации не должно быть.
Окончание манипуляции:
- Снять перчатки, поместить их в дезинфицирующий раствор.
- Вымыть руки, осушить полотенцем.
Примечание: определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15 – 25 0С.
Определение группы крови по стандартным сывороткам
Группы крови разделяются с учетом наличия в эритроцитах человека антигенов-агглютиногенов А и В и соответственно в сыворотке крови антител-агглютининов a и b. При контакте одноименных агглютиногенов и агглютининов происходит реакция агглютинации (склеивание, «образование песка») эритроцитов с последующим их разрушением (гемолизом). В крови каждого человека могут находится лишь разноименные агглютиноген и агглютинин. По Янскому выделены 4 группы крови; в клинической практике используют понятие «группа крови по системе АВО».
Для определения групп крови применяют стандартные изогемагглютинирующие сыворотки. В сыворотке имеются агглютинины, являющиеся антителами всех 4 групп крови, а их активность определяется титром.
Тарелку делят цветным карандашом на 4 квадрата и в направлении по часовой стрелке обозначают квадраты I(0), II(А), III(В). В соответствующий квадрат тарелки пипеткой наносят крупную каплю сыворотки двух серий I(0), II(А), III(В) групп. Подушечку пальца обрабатывают спиртом и делают прокол кожи иглой-копьем. Первую каплю крови снимают марлевым шариком, последующие разными уголками предметного стекла вносят последовательно в капли сыворотки и тщательно размешивают. Капля вносимой крови должна быть в 5-10 раз меньше капли сыворотки. Затем путем покачивания тарелки тщательно перемешивают кровь с сывороткой. Предварительные результаты оценивают через 3 мин, после чего добавляют каплю изотонического раствора хлорида натрия, вновь смешивают путем покачивания тарелки и через 5 мин проводят окончательную оценку реакции агглютинации.
При положительной реакции изогемагглютинации хлопья и зернышки из склеившихся эритроцитов не расходятся при добавлении изотонического раствора хлорида натрия и перемешивании. При отрицательной реакции капли сыворотки на тарелке прозрачные, равномерно розового цвета, не содержат хлопьев и зерен. Возможны следующие 4 комбинации реакций агглютинации со стандартными сыворотками I(0), II(А), III(В) групп:
Первая группа Вторая группа
Третья группа Четвёртая группа
Понятие о группах крови
Группы крови системы АВ0
Группы крови системы АВ0 были открыты в 1900 году К.Ландштейнером, который смешивая эритроциты одних лиц с сывороткой крови других лиц, обнаружил, что при одних сочетаниях кровь свертывается, образуя хлопья (реакция агглютинации), а при других нет. На основании этих исследований Ландштейнер разделил кровь всех людей на три группы: А, В и С. В 1907 году была обнаружена еще одна группа крови.
Было установлено, что реакция агглютинации происходит при склеивании антигенов одной группы крови (их назвали агглютиногенами), которые находятся в красных кровяных тельцах - эритроцитах с антителами другой группы (их назвали агглютининам), находящимися в плазме - жидкой части крови. Разделение крови по системе АВ0 на четыре группы основано на том, что кровь может содержать или не содержать антигены (агглютиногены) А и В, а также антитела (агглютинины) α (альфа или анти-А) и β (бета или анти-Б).
Первая группа крови - 0 (I)
I группа - не содержит агглютиногенов (антигенов), но содержит агглютинины (антитела) α и β. Она обозначается 0 (I). Так как эта группа не содержит инородных частиц (антигенов), то ее можно переливать всем людям. Человек с такой группой крови является универсальным донором.
Вторая группа крови А β (II)
II группа содержит агглютиноген (антиген) А и агглютинин β (антитела к агглютиногену В). Поэтому ее можно переливать только тем группам, которые не содержат антиген В - это I и II группы.
Третья группа крови Вα (III)
III группа содержит агглютиноген (антиген) В и агглютинин α (антитела к агглютиногену А). Поэтому ее можно переливать только тем группам, которые не содержат антиген А - это I и III группы.
Четвертая группа крови АВ0 (IV)
IV группа крови содержит агглютиногены (антигены) А и В, но содержит агглютининов (антител). Поэтому ее можно переливать только тем, у кого такая же, четвертая группа крови. Но, так как в крови таких людей нет антител, способных склеиться с вводимыми извне антителами, то им можно переливать кровь любой группы. Люди с четвертой группой крови являются универсальными реципиентами.
Группы крови по системе АВО
Методика определения групп крови
Групповая принадлежность крови по системе АВО определяется при помощи реакции агглютинации. В настоящее время существует три способа определения групп крови по системе АВО:
По стандартным изогемагглютинирующим сывороткам;
С помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В).
Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам
Суть метода сводится к обнаружению в испытуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных сывороток. Для этих целей используется реакция агглютинации. Пробу нужно делать в помещении с хорошим освещением при температуре 15-25° С.
Для проведения пробы необходимы: - Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп О (I), А (II), В (III) и АВ (IV) двух различных серий. Сыворотки для определения групп крови изготавливают из донорской крови в специальных лабораториях. Хранятся сыворотки в холодильнике при температуре 4 - 8° С. Срок годности сыворотки указывают на этикетке. На этикетке также указывается титр (то максимальное разведение сыворотки, при котором может наступить реакция агглютинации), который должен быть не ниже 1: 32 (для сыворотки В (III) - не ниже 1:16 /32). Сыворотка должна быть прозрачной, без признаков гниения. Стандартные сыворотки для удобства подкрашивают в определенный цвет: О (I) - бесцветная (серая), А (II) - синяя, В (III) - красная, АВ (IV) - ярко-желтая. Эти цвета сопутствуют всем этикеткам на препаратах крови, имеющих групповую принадлежность (кровь, эритроцитная масса, плазма и др.).
Белые фарфоровые или эмалированные тарелки или другие пластинки со смачиваемой поверхностью, маркированные, согласно группам крови.
Изотонический раствор хлорида натрия.
Иглы, пипетки, стеклянные палочки (предметные стекла).
Техника проведения реакции.
1. Под соответствующими обозначениями группы крови на тарелку (пластинку) наносят сыворотку I, II, III групп в объеме 0,1 мл (одна большая капля диаметром около 1 см). Чтобы избежать ошибок, наносят две серии сывороток, поскольку одна из серий может иметь низкую активность и не дать четкой агглютинации. Таким образом, получается 6 капель, образующих два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: 0 (I), А (II), В (III).
2. Кровь для исследований берут из пальца или из вены. Сухой стеклянной палочкой на пластину в 6 точек последовательно переносят 6 капель исследуемой крови величиной примерно с булавочную головку 0,01 мл (маленькая капля), каждую рядом с каплей стандартной сыворотки. Причем количество сыворотки должно в 10 раз превышать количество исследуемой крови. Затем их осторожно перемешивают между собой стеклянными палочками с закругленными краями.
Возможна и более простая методика: на тарелку наносится одна большая капля крови, потом ее забирают оттуда уголком предметного стекла и переносят каждую каплю сыворотки, аккуратно перемешивая ее с последней. При этом кровь каждый раз берут чистым уголком стекла, следя за тем, чтобы капли не смешивались.
3. Смешав капли, тарелку периодически покачивают. Агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд. Но наблюдение следует вести не менее 5 минут, так как возможна более поздняя агглютинация, например с эритроцитами группы А 2 (II).
4. В те капли, где произошла реакция, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают результаты реакции.
Реакция агглютинации может быть положительной или отрицательной
При положительной реакции в течение первых 10-30 секунд наблюдают в смеси видимые невооруженным глазом мелкие красные зернышки (агглю-тинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Мелкие зернышки постепенно сливаются в более крупные зерна или даже в хлопья неправильной формы. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет.
Результаты реакций двух серий в каплях с сывороткой одной и той же группы должны совпадать.
Принадлежность исследуемой крови к соответствующей группе определяют по наличию или отсутствию агглютинации при реакции с соответствующими сыворотками.
Если все сыворотки дали положительную реакцию, значит, испытуемая кровь содержит оба агглютиногена - А и В. Но в таких случаях, чтобы исключить неспецифическую реакцию агглютинации, следует провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной сывороткой группы АВ (IV).
Определение групп крови моноклональными антителами
Для определения групп крови этим способом используют моноклинальные антитела, которые получают с помощью гибридомной, биотехнологии.
Гибридома - это клеточный гибрид, образованный путем слияния клетки костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, который синтезирует специфические моноклональные антитела. Гибридома обладает способностью к неограниченному росту, характерна для опухолевой клетки и присущей лимфоциту способностью синтезировать антитела.
Разработаны стандартные реагенты-моноклональные антитела (МКА): цоликлоны анти-А и анти-В, применяемые для определения агглютиногенов эритроцитов. Цоликлоны представляют собой лиофилизированный порошок красного (анти-А) и синего (анти-В) цвета, который разводят изотоническим раствором хлорида натрия непосредственно перед пробой.
Техника проведения.
Цоликлоны анти-А и анти-В наносят на белый планшет по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А или анти-В. Рядом с каплями антител следует нанести по одной маленькой капле исследуемой крови. После перемешивания компонентов наблюдают за реакцией агглютинации в течение 2-3 минут. Оценка результатов очень проста.
Определение групповой принадлежности крови может сопровождаться ошибками, которые ведут к неправильной трактовке результатов. Можно выделить три основные группы ошибок: ошибки, связанные с низким качеством реагентов; технические ошибки; ошибки, связанные с особенностями Схема оценки результатов определения групп крови спомощью моноклональных антител(цоликлоны анти-А и анти-В)исследуемой крови. Первых двух можно избежать, строго соблюдая описанные выше требования к сыворотке, условиям проведения реакции и др. Третья группа связана с явлением неспецифической панагглютинации (феномен Томсена), сущность которого состоит в том, что сыворотка при комнатной температуре дает агглютинацию со всеми эритроцитами, даже со своими собственными (аутоагглютинация), а эритроциты в то же время дают агглютинацию со всеми сыворотками, даже с сывороткой группы АВ. Подобное явление описано при ряде заболеваний: болезнях крови, спленомегалии, циррозе печени, инфекционных заболеваниях и др. Описана также панагглютинация и аутоагглютинация у здоровых людей.
Явление панагглютинации и аутоагглютинации наблюдается только при комнатной температуре. Если определение групповой принадлежности проводить при температуре 37° С, они исчезают.
Нужно строго помнить, что во всех случаях нечеткого или сомнительногскрезультата следует провести повторное определение групп крови при помощи стандартных сывороток других серий, а также перекрестным способом.
Определение группы крови стандартными изогемагглютинирующими сыворотками (прямой способ).
Указанные сыворотки выпускаются станциями переливания крови во флаконах или ампулах по 5 мл, подкрашенные в соответствующий группе крови цвет.
На этикетке должны быть указаны:
название учреждения, где изготовлена сыворотка;
групповая принадлежность сыворотки с обязательным указанием агглютининов;
номер серии;
титр агглютининов в сыворотке;
срок годности;
Для проведения реакции пригодны сыворотки с титром агглютининов не ниже 1:32.
Хранятся сыворотки в холодильнике при температуре +2-4ºС. Допускается замораживание сыворотки - ее можно использовать после оттаивания. Перед применением необходимо убедиться, что в сыворотке нет хлопьев и осадка, она сохранила соответствующий группе цвет. Перед постановкой реакции сыворотка должна согреться до комнатной температуры (+15-25ºС) в течение 30-40 мин. Тарелка или пластинка, на которой ставится реакция, также должна иметь комнатную температуру.
Техника определения группы крови при помощи стандартных сывороток
Оснащение:
Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп Оαβ(I), Аβ(II), Вα(III) двух серий и сыворотка группы АВо(IV) одной серии.
Изотонический раствор хлорида натрия.
Белые фарфоровые или любые другие пластинки (тарелки) со смачиваемой поверхностью, разделенные на четыре сектора, обозначенные соответственно группам крови.
Маркированные для каждой группы крови и серии сывороток пипетки.
Стеклянные или пластмассовые палочки с округлыми концами для перемешивания крови.
Техника выполнения:
На краю пластинки (тарелки) пишут фамилию и инициалы пациента.
Под соответствующими обозначениями на пластинку (тарелку) наносят по капле (приблизительно 0,1 мл) сывороток групп Оαβ(I), Аβ (II), Вα (III) двух серий. Сыворотку берут из каждого флакона отдельной пипеткой, которая затем остается во флаконе.
Кровь для исследования берут из места укола мякоти концевой фаланги пальца. Можно также использовать цельную венозную кровь или взвесь эритроцитов после сворачивания или центрифугирования крови с Htне менее 30%. Капли крови величиной приблизительно 0,01 мл последовательно наносят стеклянной палочкой на пластинку (тарелку) рядом с каплей стандартной сыворотки. Таким образом, соотношение крови и сыворотки получается 1:10.
Стеклянной палочкой перемешивают капли крови и сыворотки до равномерного окрашивания смеси в розовый цвет. Необходимо или каждый раз использовать новую палочку, или после каждого перемешивания промывать палочку в стакане с физиологическим раствором и насухо вытирать чистой марлей или ватой.
После перемешивания пластинку осторожно покачивают в руках до истечения времени постановки реакции. Этим предотвращается неспецифическая агглютинация эритроцитов («ложная агглютинация»).
Результат реакции оценивают через 5 мин. В случае наступления агглютинации с сыворотками всех групп ставится аналогичная реакция с сывороткой четвертой группы, одной серии. Заключение о принадлежности крови к IVгруппе делается при отсутствии агглютинации с сывороткойIVгруппы. При сомнительных результатах реакции по истечении 5 минут в капли, где произошла агглютинация можно добавить по 1-2 капли изотонического раствора хлорида натрия и слегка покачать пластинку. «Ложная агглютинация» при этом исчезнет.
Трактовка результатов реакции
Реакция гемагглютинации может быть положительной и отрицательной. При положительной реакции образуются агглютинанты, имеющие вид крупинок или хлопьев, а капля изогемагглютинирующей сыворотки почти полностью обесцвечивается. При отрицательной реакции сыворотка продолжает оставаться окрашенной в розовый цвет и в ней не обнаруживается агглютинантов. Результаты реакций с сывороткой одной и той же группы разных серий должны совпадать.
Необходимо указать, что в соответствии с новой «Инструкцией по применению компонентов крови» (2002) в отличие от Инструкции 1998 г в технику прямого способа определения групп крови внесены следующие изменения:
Соотношение крови и сыворотки – 1:10. Ранее – 1:5 – 1:7.
Добавление физиологического раствора производится только по истечении 5 минут, то есть по истечении срока проведения реакции. Ранее изотонический раствор хлорида натрия добавлялся по мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 мин. от начала реакции.
Прямой способ определения группы крови даже при технически безупречном выполнении предполагает хотя и очень небольшую (доли процента), но достоверную вероятность ошибки. Основными причинами возможных ошибок являются наличие подгрупп и «кровяные химеры». Для ликвидации возможных ошибок результат прямой реакции перепроверяется перекрестным способом.
Показания: необходимость переливания крови, подготовка к оперативному вмешательств.
Приготовить: стандартную тарелочку с углублениями; набор стеклянных палочек; изотонический раствор хлорида натрия ; набор гемагглютинирующих сывороток 1, 2, 3, 4 групп двух серий; пипетки; исследуемую взятую из вены или пальца кровь; часы; лотки; перчатки; емкости для отработанного материала; контейнеры с дезинфицирующими растворами.
Подготовка к манипуляции:
- Медицинская сестра полностью подготовлена к выполнению манипуляции: одета в костюм (халат), маску, перчатки, колпак, сменную обувь.
- Проверить качество стандартных гемагглютинирующих сывороток по: цветовой маркировке, внешнему виду (светлая, прозрачная); сохранность упаковки, наличию правильно оформленной этикетки.
- Подготовить все необходимое для выполнения манипуляции.
Выполнение манипуляции:
На белую тарелочку, согласно обозначению, последовательно нанести по одной капле сыворотки 1, 2, 3 групп двух серий. Каждую пипетку немедленно опускать в ту же ампулу (флакон) из которых они были взяты;
С помощью стеклянной палочки нанести рядом с углублениями (6 углублений) по капле исследуемой крови. Капля крови должна быть в 10 раз меньше капли сыворотки;
Отметить время и чистой, сухой стеклянной палочкой перемешать кровь с сывороткой 1 гр., затем другой палочкой 2 гр. и т.д. во всех углублениях;
По мере наступления агглютинации, но не ранее 3 минуты, в те капли, в которых наступила реакция агглютинации добавить по одной капле изотонического раствора хлорида натрия для исключения ложной агглютинации и продолжать наблюдение в течение 5 минут.
Оценка результатов:
а) при положительной реакции в смеси появляются видимые глазом мельчайшие зернышки, состоящие из склеившихся эритроцитов. Мелкие зерна сливаются в крупные зерна, а иногда в хлопья, сыворотка при этом - обесцвечивается;
б) при отрицательной реакции жидкость остается равномерно окрашенной в розовый цвет;
в) возможны 4 комбинации положительной и отрицательной реакции:
1. Если агглютинации нет ни в одной из ячеек, то кровь I (0) группы.
2. Если агглютинация в первой и третей ячейках, то кровь II (А) группы.
3. Если агглютинация в первой и второй группах, то кровь III (В) группы.
4. Если агглютинация в первой, второй, третей ячейках, то кровь IV (АВ) группы.
Для исключения ошибки проверяют кровь с сывороткой 4 группы, где агглютинации не должно быть.
Окончание манипуляции:
- Снять перчатки, поместить их в дезинфицирующий раствор.
- Вымыть руки, осушить полотенцем.
Примечание: определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15 - 25 0 С.
«Люди голубой крови», «королевская кровь», «кровный брат» - существует много выражений, которые затрагивают одну из важнейших систем в организме человека. Она отвечает за тканевое питание, дыхание, обмен веществ, всасывание и усваивание питательных веществ. Роль кровеносной системы сложно переоценить. Здесь нет мелочей. Так, групповая принадлежность и резус-фактор играют большую роль в жизни человека. Особенно это важно для женщины. Определение группы, биохимический и другие анализы предваряют любое вмешательство в организм пациента. Лечение практически каждого заболевания начинается с взятия биологического материала для исследования.
В Японии считают, что характер человека полностью зависит от того, какая у него групповая принадлежность крови. У обладателей первой группы преобладают такие качества, как самоуверенность и решительность. Люди со второй группой крови надежны, но замкнуты в себе. Те, кто обладают третьей, чаще всего честолюбивы и умны. У требовательных, уравновешенных людей течет в жилах кровь четвертой группы. По этому принципу многие создают семьи, заводят друзей, работодатели подыскивают себе сотрудников.
На Австралийском континенте живет удивительный человек Джеймс Харрисон. За свои 74 года он успел сдать кровь около 1000 раз! Медики утверждают, что как минимум 2 млн новорожденных детишек сумел спасти этот необычный донор. Он обладает не только самой редкой группой, но и может похвастаться наличием особых антител, которые помогают младенцам с тяжелой анемией успешно бороться с недугом.
Система АВО
В мире существует 4 группы крови, имеющих свои особенности. Первая группа не содержит белков антигенов А и В, поэтому она является универсальной в качестве донорской. Но человеку, имеющую такую группу крови, нельзя переливать никакую другую, кроме первой. Вторая группа носит антигены А. Она совместима с первой и второй. Третья группа крови имеет в своем составе антигены В. И к ней идеально подходит первая или третья. Четвертая группа содержит антигены А и В, и она совместима с кровью любой группы. В настоящее время врачи стараются осуществлять переливание реципиенту той же группы, что и его собственная.
Это общепринятая система, в которой работают все медицинские учреждения мира. Определение группы крови и резус-фактора проводят всем новорожденным детям, людям перед любым оперативным вмешательством, переливанием крови и ее компонентов. Особенно за этими показателями у женщин во время беременности наблюдают акушеры-гинекологи.
Методы определения группы крови
Существует несколько способов определения групповой принадлежности крови человека в лабораторных и даже домашних условиях:
- По стандартным сывороткам.
- По стандартным эритроцитам.
- С применением цоликлонов.
- По группе крови родителей.
Важно отметить, что определение группы крови и резус-фактора последним способом не является достоверным. Этот метод можно назвать «домашним». Он подходит в качестве развлечения подросшим детишкам, для лучшего понимания того, как же происходит наследование подобных признаков ребенком.
Как определить группу крови, используя цоликлоны
Применение цоликлонов - это простой и современный способ определения группы крови человека и ее резус-фактора. Препарат получают из биологического материала мышей и повсеместно используют в системе АВО. Плюсы цоликлонов в том, что они быстрее агглютинируются, то есть сворачиваются, с кровью и реакция становится более выраженной. Чаще всего лаборанты используют реагенты анти-А и анти-В, однако в некоторых случаях работают и с анти-АВ и анти-О. Определение группы крови с помощью цоликлонов требует меньше времени и подготовки.
На специальном планшете делают две надписи соответственно названиям используемых цоликлонов. Под ними наносят небольшую каплю исследуемой крови, рядом - немного реагента. Стеклянной или любой другой чистой палочкой перемешивают обе жидкости, затем в течение двух минут медленно покачивают планшет для лучшего соединения и сворачивания белков. По реакции агглютинации судят о результатах. Полное отсутствие склеивания говорит о том, что исследуемая кровь принадлежит к первой группе. Склеивание с цоликлоном анти-А доказывает, что она относится к второй группе. Если наблюдается реакция с реагентом анти-В, значит, у пациента кровь третьей группы. При агглютинации с обоими цоликлонами ясно, что исследуемый материал содержит антигены А и В. Следовательно, является кровью четвертой группы.
Определение группы крови и резус-фактора с помощью цоликлонов является наиболее удобным и распространенным в настоящее время. Для того чтобы узнать резусную принадлежность, нужно на планшет нанести несколько капель цоликлона анти-D-супер и одну - исследуемой биологической жидкости. Далее нужно их смешать. Наличие реакции свертывания говорит о том, что пациент имеет положительный резус-фактор. Соответственно, отсутствие агглютинации означает то, что резус отрицательный.
Определение группы крови стандартными сыворотками
В этом случае используют стандартные сыворотки четырех известных групп. Каждого реагента берут по две серии, чтобы обеспечить наиболее точный результат. Для облегчения работы сыворотки окрашены каждая в свой цвет: О(I) - бесцветная, А(II) - синяя, В(III) - красная, АВ(IV) - желтая. На специальный планшет наносят сыворотки первых трех групп по две серии каждой. Рядом капают по одной капле исследуемой крови, взятой из пальца. Планшет аккуратно покачивают до полного перемешивания и по реакции агглютинации судят о результатах. Определение группы крови - это всегда скрупулезная манипуляция, которая требует внимательности и сосредоточения.
Стандартные эритроциты для определения группы крови
Определение группы крови стандартными эритроцитами - это еще один высокоточный метод выявления групповой принадлежности. Его проводят с использованием стандартных эритроцитов, полученных из материала донора. Сыворотку центрифугированной крови наносят на планшет в два ряда по три капли в каждом. Возле каждой из них помещают немного эритроцитарной массы в следующем порядке: О(I), А(II), В(III) - по две серии. Так же как и при определении группы другими методами, в этом случае тщательно перемешивают капли крови и реагенты и судят о результатах по свертыванию белка.
Определение групповой принадлежности ребенка по крови родителей
Определение группы крови по родителям - это, пожалуй, единственный «домашний» метод. Согласно закону наследования ребенок берет от отца и матери по одному антигену. В таблице ниже представлены все возможные варианты наследования ребенком группы крови.
Или I, или II | Или I, или III | Или II, или III |
||
Или I, или II | Или I, или II | Или II, или III, или IV |
||
Или I, или III | Любая с равной долей вероятности | Или I, или III | Или II, или III, или IV |
|
Или II, или III | Или II, или III, или IV | Или II, или III, или IV | Или II, или III, или IV |
Определение группы крови ребенка по таблице может дать представление о наследовании генов и позволит с пользой провести время. Этот способ не является точным. Но он достаточно информативен. Разумеется, определение группы крови по родителям - это не самый лучший метод, для достоверного результата стоит обратиться в клинику.
Забор крови
Для определения групповой принадлежности берут материал из пальца и из вены. Для анализа используют как цельную кровь, так и сыворотку, которую получают в результате центрифугирования пробирки с биологическим материалом. Детям при рождении определение группы крови и резус-фактора проводят, применяя материал, взятый из пяточки.
Анализ берут в амбулатории или стационаре в условиях полной асептики и с использованием средств антисептики. Манипуляцию может делать только человек с медицинским образованием, а проведением реакции должен заниматься лаборант. Анализ проводят несколько раз разные медработники, чтобы исключить влияние человеческого фактора на результат исследования. Существуют приборы, которые способны точно и достоверно определить группу крови и резус-фактор, но даже после использования техники всегда проводится перепроверка, ведь здесь нельзя ошибаться.
Подготовка к сдаче крови на анализ
Группа крови и резус-фактор не меняются в течение всей жизни и не зависят от приема пищи, состояния здоровья, внешних факторов. Поэтому перед сдачей анализа не требуется специфической подготовки. Однако, чтобы снизить риск ухудшения качества исследования, важно сдавать материал натощак, а ужин должен быть легким и обязательно не позже 18.00.
Группа крови на рукаве
В жизни происходят разные ситуации, никто не застрахован от травм или несчастных случаев. Каждому человеку нужно знать свою группу крови, ведь при наступлении чрезвычайных обстоятельств эта информация может спасти жизнь в прямом смысле слова. Не зря в паспорт медработники ставят всем желающим соответствующую печать. Берегите здоровье свое и своих родных людей!
В наше время медицина достигла больших высот. Врачи способны проводить долгие операции и спасать людей даже из самых, казалось бы, безвыходных в плане выживания ситуаций. Однако, в таких случаях приходится сталкиваться с проблемой необходимости переливания крови. Долгое время это было мало осуществимо в связи с тем, что пациенты умирали очень быстро. Но данный вопрос был решен открытием понятия групп крови, а точнее обнаружения на эритроцитах антигенов и, в свою очередь, антител в плазме крови.
В начале двадцатого века Австралийский врач, по совместительству ученый К. Ландштейнер открыл наличие в крови антигенов и антител. Антигены находятся на поверхности эритроцитов. Их бывает 2 вида. Для простоты биологи обозначили их как A и B. В свою очередь антитела содержатся в плазме крови и получили названия α и β. Если A соединить с α, а B с β, начнется процесс сворачивания крови. Данная реакция носит название гемагглютинация.
Таким образом из имеющихся наборов антигенов и антител можно составить 4 типа крови, приведенных в таблице ниже:
| Номер группы | Мировое обозначение | Антигены | Антитела |
|---|---|---|---|
| I | 0 | Отсутствуют | α и β |
| II | A | A | β |
| III | B | B | α |
| IV | AB | A и B | Отсутствуют |
Важно! В зависимости от того, какой тип донорской крови предоставляется для переливания, кровь пациента либо сворачивается, либо нет. Первый случай грозит летальным исходом.
Сыворотки для проведения реакции
На текущий момент имеется достаточно большое количество способов определения группы крови. Но большая часть из них рассчитана на анализ в крупных лабораториях. Однако, даже если вы находитесь в маленькой деревушке или в месте, где никак не получится обратиться в подобные учреждения, возможность выявления номера группы крови все равно остается.
Определение группы крови осуществляется с применением четырех специальных стандартных сывороток, которые будут изготавливаться из крови человека. Они выпускаются либо во флакончиках, либо в ампулах по 2-5 мл и соответствуют разным группам крови:
- 0. Выпускается с белой этикеткой и имеет прозрачный цвет.
- A. Жидкость голубой окраски. На флакон наносятся две синие полосы.
- B. Жидкость бледно-розового оттенка. На флаконе присутствуют три полосы той же окраски.
- AB. Жидкость желтого окраса. На флакон нанесены 4 полосы того же цвета.
Важно! На самом деле указанные реагенты при изготовлении не имеют цвета. Они окрашиваются специально, чтобы при использовании их было невозможно перепутать.
Также на этикетки наносятся:
- титр;
- дата производства;
- срок годности;
- данные об изготовителе;
- серийный номер.
Как определяется группа крови
Чтобы определить группу крови, понадобится:
- плоская тарелка с 8 углублениями;
- стеклянные палочки или пипетки - 8 штук;
- 2 набора сывороток разной серии для исключения возможности ошибок;
- обычные или песочные часы.
На плоскую тарелку помещаются сыворотки в 2 ряда, после чего берутся стеклянные палочки. С их помощью в ряды вносится исследуемая кровь. Этими палочками она размешивается, после чего тарелку начинают покачивать. Если повезет, процесс можно отследить за 10-30 секунд, но лучше это делать до 5 минут, чтобы исключить возможность заторможенности реакции. Затем происходит изучение и расшифровка полученных результатов.
Внимание! В первую очередь следует обратить внимание на кружки, в которые была налита сыворотка II и III групп крови. Интерес представляет наличие мелких хлопьев, появляющихся в результате агглютинации - слипания эритроцитов.
- Если ни во II, ни III хлопьев нет, а также при дополнительной проверке ни в I, ни IV также ничего не свернулось, значит имеется первая группа крови.
- Если в результате свертывание отмечается везде, кроме сыворотки II группы, значит исследуемая кровь относится ко второй группе.
- Если свертывание наблюдается во всех образцах, кроме сыворотки III группы, значит исследуемая кровь относится к одноименной группе.
- Если сворачивание прошло во всех образцах, кроме сыворотки IV группы, значит анализу была подвержена одноименная группа крови.
Важно! Строго говоря, группу крови можно определить, имея сыворотки только 2 и 3 группы крови. Однако, как можно сделать вывод из сути метода, имеется большое влияние человеческого фактора. По этой причине сыворотки I и IV группы крови используются в качестве дополнительной проверки.
После процедуры используемая посуда должна быть хорошо промыта теплой водой и высушена. Затем ее можно использовать для дальнейших исследований.
Неточности результатов и их причины
Иногда бывает так, что сгустки слипшихся эритроцитов видны не очень четко. Во время проверки зачастую может быть добавлен изотонический раствор хлорида натрия. Он позволяет исключить вероятность ложной агглютинации, заставляя рассыпаться обратно хлопья, получившиеся не в результате процесса свертывания.
Важно! Если результат анализа виден не особо четко, его необходимо переделать и воспользоваться микроскопом, чтобы рассмотреть мелкую агглютинацию.
В случае четко выявленного результата можно сразу точно назвать пациенту его группу крови. Иначе следует обратиться к другим методам проведения анализа.
Не стоит забывать и о возможности ошибок, которые обычно происходят по следующим причинам:
- использование просроченной или слабой сыворотки;
- использование слишком большого количества исследуемой крови по отношению к объему сыворотки;
- реакция проводится намного дольше, чем положено нормативами;
- температура окружающей среды не соответствует нормальной, в результате чего происходит холодовая агглютинация эритроцитов.
Дополнительно стоит заметить, что в процессе высыхания по краям смеси сыворотки и исследуемой крови возможно образование зернистых участков, которые не могут служить показателями реакции.
Использование результата на практике
Как уже упоминалось, определение группы крови проводится для исключения летального исхода во время ее переливания. В идеале пациенту, принимающему кровь - реципиенту - необходимо переливать кровь той же группы, что и у него самого. Однако так получается далеко не всегда. Хотя бы потому, что людей с первой группой крови подавляющее количество - 50%. В то же время они являются универсальными донорами, поскольку у них отсутствуют агглютиногены, которые стимулируют процесс свертывания крови.
Внимание! Что касается пациентов с IV группой крови, то их можно назвать универсальными реципиентами, поскольку их организм способен принять кровь любой группы. В то же время их кровь не может быть перелита представителям другой группы.
Для наглядности совместимости доноров и реципиентов приведем таблицу:
Номер группы Для каких групп становится донором Для каких групп становится реципиентом I I, II, III, IV I II II, IV I, II III III, IV I, III IV IV I, II, III, IV
В современном мире знание группы крови жизненно необходимо. От этого, с точки зрения врачей, будет зависеть коэффициент выживаемости из пациентов. С точки зрения обычных людей это шанс в экстренной ситуации сохранить свою жизнь. В связи с этим не лишним будет знать свою группу крови и, по возможности, проставлять ее в паспорт либо другие документы, поскольку риск здоровью и жизни может возникнуть в любой момент.
Видео — Определение группы крови
Видео — Определение группы крови и резус-фактора
